色譜柱是有一定壽命的,為了降低分析成本,我們都會(huì)盡量延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。有專(zhuān)家曾對(duì)色譜柱的使用壽命做過(guò)調(diào)查,在2011年的時(shí)候,約有四分之一接受調(diào)查的用戶(hù)色譜柱的使用壽命在500針以上,并且接受調(diào)查的用戶(hù)中有接近一半的用戶(hù)進(jìn)樣次數(shù)超過(guò)了1000次,而進(jìn)樣次數(shù)不到500的用戶(hù)不到30%。調(diào)查結(jié)果顯示,從1997年到2011年,進(jìn)樣次數(shù)超過(guò)500次和超過(guò)1000次的用戶(hù)比例是逐年增加的,相反小于500次的用戶(hù)比例則是下降的。造成這種情況的原因可能有兩方面,一方面是柱子裝填工藝的改進(jìn),另一方面則是操作人員對(duì)柱子的使用和保護(hù),而后者可能起的作用更大。
那么作為分析人員我們?cè)趺幢Wo(hù)色譜柱呢?
首先樣品要經(jīng)過(guò)前處理,前處理過(guò)程中對(duì)樣品中不需要的化學(xué)物質(zhì)和微型顆粒去除的越好,對(duì)柱子壽命的延長(zhǎng)就越有利。經(jīng)過(guò)前處理的樣品在進(jìn)樣之前要經(jīng)過(guò)微孔濾膜過(guò)濾,經(jīng)常使用的濾膜有0.45 um和0.2 um兩種,根據(jù)使用的色譜柱選擇不同孔徑的濾膜,濾膜的孔徑不大于色譜柱進(jìn)口篩板的孔徑,我們經(jīng)常使用的濾膜為0.45um。在進(jìn)樣前離心也可以去除微型顆粒,并且有實(shí)驗(yàn)證明,這種方法在沉淀蛋白樣品時(shí),效果更好。
使用在線過(guò)濾器,在進(jìn)樣器和柱子或保護(hù)柱之間連接一個(gè)在線過(guò)濾器,可以將過(guò)濾未除掉的微粒攔住,以免進(jìn)入色譜柱。當(dāng)系統(tǒng)壓力增加時(shí),可以?xún)?yōu)先考慮在線過(guò)濾器的堵塞,出現(xiàn)這種情況,根據(jù)所進(jìn)的樣品使用相應(yīng)的試劑超聲處理,若不能解決問(wèn)題,則更換。
使用保護(hù)柱。保護(hù)柱裝在分析柱之前,與分析柱的填料一致,一方面保護(hù)柱可以除去可能堵塞分析柱的顆粒物質(zhì),另一方面保護(hù)柱可以吸附對(duì)分析柱有強(qiáng)烈吸附或者不可逆吸附的物質(zhì),延長(zhǎng)分析柱的壽命。當(dāng)然,保護(hù)柱也是有一定壽命的,這就需要衡量一下使用保護(hù)柱是不是有意義。
在裝填技術(shù)已經(jīng)成熟的情況下,柱子壽命的差別更多的取決于使用者對(duì)柱子的使用和維護(hù)。樣品經(jīng)過(guò)前處理后過(guò)濾或離心,在進(jìn)色譜柱前經(jīng)過(guò)在線過(guò)濾器和保護(hù)柱。同時(shí),在每次進(jìn)樣結(jié)束后,使用強(qiáng)溶劑沖洗柱子,出去柱子上的強(qiáng)保留物質(zhì),也能延長(zhǎng)色譜柱的壽命。